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  • Annexin V-FITC apoptosis assay kit
  • Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒
  • 貨號: abs50001
    產品說明書
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    貨號-規格 貨期 價格 數量
    abs50001-25T 現貨 ¥630.00
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    abs50001-50T 現貨 ¥1050.00
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    abs50001-100T 現貨 ¥1838.00
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    大包裝詢價
    產品描述
    描述

    在正常細胞中,磷脂酰絲氨酸只分布在細胞膜脂質雙層的內側,細胞發生凋亡最早期,膜磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內側翻向外側,這一變化早于細胞皺縮、染色質濃縮、DNA片斷化和細胞膜的通透性增加等凋亡現象。Annexin V是一種磷脂結合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種核酸染料, 它不能透過完整的細胞膜,但凋亡中晚期的細胞和死細胞由于細胞膜通透性的增加,PI 能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V 與PI 匹配使用,就可以將處于不同凋亡時期的細胞區分開來。

    產品組分
    25 Tests 50 Tests 100 Tests
    AnnexinV-FITC 125μl250μl500μl
    10×Binding Buffer1.5ml2.5ml6.5ml
    Propidium Iodide125μl250μl500μl
    操作步驟
    貼壁細胞需用 0.25%的胰酶消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加 2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的胰酶消化時,注意必須徹底清除EDTA:在標記前用 1×PBS或 1×binding buffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結合。
    (1) 用去離子水將 10×Binding Buffer 稀釋成 1×Binding Buffer;
    (2) 細胞收集:懸浮細胞收集:離心 5 分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的胰酶消化收集后( 注:胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰絲氨酸與Annexin V-FITC 的結合),在室溫中,2000rpm 離心 5~10 分鐘,收集細胞;
    (3) 細胞洗滌:用預冷 1×PBS(4℃)重懸細胞一次,2000rpm 離心 5~10分鐘,棄上清洗滌細胞;
    (4) 加入 300μL 的 1×Binding Buffer 懸浮細胞;
    (5) Annexin V-FITC 標記:加入 5μL 的 Annexin V-FITC 混勻后,避光,室溫孵育 15 分鐘;
    (6) PI 標記:上機前 5 分鐘再加入 5μL 的 PI 染色。
    (7) 上機前,補加 200μL 的 1×Binding Buffer。
    操作說明
    (1) 使用前低速離心,以免液體積存管蓋和管壁;
    (2) 本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
    (3) PI(propidium iodide,溴化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
    (4) Annexin V-FITC 和 PI 是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
    (5) 整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在 4℃下操作,以免影響細胞狀態。
    (6) 在細胞洗滌的最后一步,請盡量將上清棄凈,以免 PBS 殘留,有可能會影響實驗結果。
    (7) 為防止熒光衰變,宜在 1 小時內進行流式檢測。
    (8) PI 染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首先進行Annexin V-FITC 染色,最短可在上機前 5 分鐘再加入 PI 染色。
    基本信息
    別名
    Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒
    概述
    儲存/保存方法
    4℃保存6個月;避免反復凍融。
    溫馨提示:本產品僅作科研實驗使用,不支持臨床等研究
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    • 有哪些注意事項
    • 1. 由于凋亡檢測的為活細胞,因此整個收集細胞的操作過程盡量保持細胞活性,避免人為損傷細胞, 如:避免用力吹打細胞,避免胰酶消化時間過長,用冰浴的PBS清洗細胞,縮短上機檢測的時間。 2. Annexin-V染料上帶FITC熒光,因此從染色開始注意避光操作和孵育,一般盡量在染色后半個小時內 上機檢測。 3. 如果處理的細胞中含有GFP會干擾FITC的熒光信號,應該更換不同波長的熒光染料標記的Annexin-V。 4. 如果樣品來源于血液,請務必除去血液中的血小板,因為血小板含有PS,能與Annexin-V結合, 從而干擾實驗結果。 5. 在消化液中盡量不用EDTA,EDTA會影響Annexin-V與PS的結合,若胞內已轉染GFP, 建議使用AnnexinV-PE。 6. 如果樣本來源為貼壁細胞,建議使用Accutase酶。 7. 建議細胞密度為1-5*106/ml,為保證實驗結果,最佳細胞密度需自行摸索。

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